650. PARTICULAS EN INYECTABLES

Las partículas presentes en las soluciones inyectables son sustancias extrañas móviles insolubles. Las soluciones inyectables, incluyendo las obtenidas por disolución de sólidos estériles, deben estar libres de partículas que puedan detectarse por inspección visual. La inspección visual, en condiciones estandarizadas, de la totalidad del lote producido se acepta para determinar la ausencia de partículas visibles en soluciones inyectables. Sin embargo, todos los inyectables de gran volumen y aquéllos de pequeño volumen, deben cumplir con los ensayos para la determinación de partículas subvisibles que se indican en este capítulo.

Los ensayos que se describen a continuación se emplean para contar las partículas extrañas subvisibles dentro de intervalos específicos de tamaño. Se describen dos procedimientos para la determinación de partículas en inyectables, uno de bloqueo de luz y otro microscópico. Las formulaciones inyectables son analizadas primero por el Ensayo de recuento de partículas por bloqueo de luz, si no cumplen con las especificaciones de este ensayo, se procede con el Ensayo de recuento microscópico de partículas. No todas las formulaciones inyectables pueden ser analizadas por medio de estos ensayos para determinar la presencia de partículas. Si el producto no es una solución, con transparencia y viscosidad similar a la del agua, pueden obtenerse datos erróneos al ser analizado por el método de recuento por bloqueo de luz. Dichos materiales pueden ser analizados por el método microscópico. En algunos casos, la viscosidad de un material puede ser tan elevada que imposibilite su análisis por los métodos descriptos. En dichos caso, puede realizarse una dilución cuantitativa con un diluyente apropiado para disminuir la viscosidad tanto como sea necesario, permitiendo de esta manera la realización del análisis.

En los ensayos que se describen a continuación, los resultados que se obtienen al analizar una cantidad discreta o un grupo de unidades para verificar la presencia de partículas, no se pueden extrapolar con certeza a otras unidades que no hayan sido ensayadas. Por lo tanto, deben desarrollarse planes de muestreo estadístico que se basen en factores operativos conocidos, si se desea obtener una referencia válida a partir de los datos observados para caracterizar el nivel de partículas en un grupo grande de unidades. Los planes de muestreo deberán tener en cuenta el volumen del producto, el número de partículas encontrado históricamente en el producto, en comparación con los límites, la distribución de tamaños de las partículas presentes y la variabilidad del recuento de partículas entre unidades.

Ensayo de recuento de partículas por bloqueo de luz

Este ensayo se aplica a inyectables de gran volumen, en cuyo rótulo se declara que contienen un volumen mayor o igual a 100 ml y a inyectables monodosis o multidosis de pequeño volumen, en cuyo rótulo se declara que contienen un volumen menor a 100 ml, ya sean soluciones o soluciones reconstituidas a partir de sólidos estériles, cuando se especifica expresamente en la monografía correspondiente.

Los inyectables en cuyo rótulo se declara que el producto se debe emplear con filtración están exentos de este requisito.

Aparato - Es un sistema de recuento electrónico de partículas, que emplea un sensor de bloqueo de luz, provisto de un dispositivo apropiado para la introducción de muestras.

Los parámetros críticos a tener en cuenta en la elección de un equipo son los siguientes.

Límites de concentración del sensor - Emplear un aparato que posea un límite de concentración (máximo número de partículas por ml) que sea mayor que la concentración de partículas en la muestra que se va a someter a recuento. El límite de concentración de un sensor, certificado por el fabricante se define como el nivel de recuento en el cual la coincidencia de pulsos debidos a la presencia simultánea de dos o más partículas en el intervalo de captación del sensor, representa menos del 10% de los recuentos recogidos para partículas de 10 m.

Intervalo dinámico del sensor - El intervalo dinámico del aparato empleado (intervalo de tamaños de partícula que se pueden medir y contar con precisión) debe incluir el tamaño más pequeño de partícula a determinar en los productos a ensayar.

Ambiente para el ensayo - Los productos a ensayar se deben limpiar de tal modo que no introduzcan cantidades significativas de partículas que puedan modificar el resultado del ensayo. Las muestras, los materiales de vidrio, tapas y otros equipos empleados deben prepararse preferentemente en un medio ambiente protegido por filtros de aire de alta eficiencia (HEPA). Durante la preparación de las muestras, se deben emplear guantes libres de polvo y vestimentas de las cuales no se desprendan partículas contaminantes. Limpiar los materiales de vidrio, tapas y cualquier otro elemento empleado, preferentemente sumergiéndolos en una solución de detergente no iónico. Enjuagar con agua corriente y luego enjuagar nuevamente con agua destilada o desionizada y filtrada. También pueden emplearse solventes orgánicos para facilitar la limpieza. [NOTA: en forma alternativa, se pueden emplear equipos exentos de partículas que resultan apropiados para estos ensayos]. Enjuagar el aparato con agua destilada o desionizada y filtrada, empleando una boquilla de mano a presión con un filtro en el extremo u otra fuente de agua filtrada, como por ejemplo agua destilada o desionizada pasada a través de un filtro de porosidad de 1,2 m o menor.

Para obtener los recuentos del blanco, emplear un recipiente limpio del mismo tipo y volumen al empleado en el ensayo. Transferir un volumen de 50 ml de agua destilada o desionizada y filtrada al recipiente y agitar la muestra. Desgasificar mediante sonicación (entre 80 y 120 watts) durante aproximadamente 30 segundos o dejar reposar. Agitar para suspender las partículas. Retirar y obtener los recuentos de partícula para tres muestras consecutivas de no menos de 5 ml cada una, sin tener en cuenta el primer recuento. Si se observan más de diez partículas mayores o iguales a 10 m de tamaño, o más de dos partículas mayores o iguales a 25 m de tamaño en la muestra combinada de 10 ml, el ambiente no es apropiado para el análisis de partículas, pudiendo inferirse que el agua destilada o desionizada y filtrada, y los materiales de vidrio no han sido preparados apropiadamente, o al contador está generando recuentos espurios. En este caso, repetir los pasos preparatorios hasta que las condiciones de análisis sean apropiadas para el ensayo.

Preparación muestra - Preparar las muestras a ensayar en la siguiente secuencia. Fuera del entorno del flujo laminar, retirar los cierres exteriores, precintos y cualquier rótulo adherido. Lavar exteriormente los envases con agua destilada o desionizada y filtrada según se describe en Ambiente para el ensayo. Proteger los envases de la contaminación ambiental hasta que se haya terminado el ensayo. Retirar el contenido de los envases de modo que se evite la posibilidad de generar partículas que puedan contaminar la muestra. Los envases con tapones desmontables pueden ensayarse directamente quitándoles la tapa. Asimismo, se pueden emplear dispositivos con agujas con las cuáles se penetran las tapas de las unidades. Los productos envasados en envases de plástico flexible pueden ensayarse haciendo un corte en el tubo de administración o cortando un vértice del envase.

Dependiendo de la forma farmacéutica, proceder según corresponda:

Preparaciones líquidas - El número de unidades a ensayar debe ser apropiado para proveer una evaluación estadísticamente válida de que un lote de producción u otro grupo grande de unidades, cumplan o excedan los límites establecidos. Las soluciones inyectables monodosis de pequeño volumen donde el volumen de cada unidad es menor a 25 ml pueden ensayarse combinando diez o más unidades. Para inyectables de gran volumen se deben ensayar unidades individuales. Para inyectables de gran volumen se deben ensayar unidades individuales. Para inyectables de gran volumen o inyectables de pequeño volumen donde el volumen de cada unidad es mayor o igual a 25 ml se pueden ensayar menos de diez unidades, en base a la definición de un plan de muestreo estadístico.

Contenido menor de 25 ml por cada unidad - Proceder según se indica en Preparación muestra. Mezclar y suspender las partículas en cada unidad invirtiendo veinte veces su contenido. [NOTA: debido al pequeño volumen de algunos productos, puede ser necesario agitar la solución vigorosamente para suspender las partículas completamente]. Abrir y combinar, en un envase limpio, el contenido de diez o más unidades para obtener un volumen no menor a 20 ml. Desgasificar la mezcla combinada mediante sonicación durante aproximadamente 30 segundos o dejar reposar hasta que la solución quede exenta de burbujas de aire. Agitar ligeramente, el contenido del envase teniendo cuidado de no introducir burbujas de aire o contaminación. Extraer no menos de tres alícuotas, cada una no menor de 5 ml y colocarlas en el sensor del sistema de recuento por bloqueo de luz. Descartar los datos de la primera porción.

Contenido de 25 ml o más por cada unidad - Proceder según se indica en Preparación muestra. Mezclar y suspender las partículas de cada unidad invirtiéndola veinte veces. Desgasificar la solución por sonicación durante aproximadamente 30 segundos o dejar reposar hasta que la misma quede exenta de burbujas de aire. Quitar el cierre, e insertar la sonda del contador en el centro de la solución. Agitar suavemente a mano el contenido de la unidad. Extraer no menos de tres alícuotas, cada una no menor de 5 ml, y colocarlas en el sensor del sistema de recuento por bloqueo de luz. Descartar los datos de la primera porción.

Inyectables en envases multidosis - Proceder según se indica en Contenido de 25 ml o más por cada unidad. Calcular el resultado del ensayo en base al volumen de una alícuota que equivale a la dosis máxima declarada en el rótulo; por ej., si el volumen total del envase es 50 ml y el volumen de la dosis máxima es 10 ml, el promedio del recuento de partículas por bloqueo de luz por ml se multiplica por 10 para obtener el resultado del ensayo en base a la dosis máxima de 10 ml. [NOTA: para los cálculos siguientes, considerar que el volumen de dosis máxima es equivalente al cotenido del envase total].

Polvos y liofilizados - Proceder según se indica en Preparación muestra. Los polvos y liofilizados, se pueden reconstituir, ya sea quitando la tapa para agregar el diluyente o inyectando el diluyente mediante una jeringa hipodérmica que posee un filtro de 1,2 m o más fino, teniendo cuidado de no contaminar el contenido o la tapa. Si las muestras se combinan, quitar la tapa y vaciar el contenido de cada uno en un envase limpio. Colocar el cierre y agitar el envase para disolver la muestra. [NOTA: para ciertos productos puede ser necesario dejar en reposo las unidades durante un intervalo apropiado y luego agitar nuevamente hasta que la muestra se disuelva completamente]. Después que la muestra se haya disuelto completamente, mezclar y suspender las partículas presentes de cada unidad invirtiendo veinte veces su contenido antes del ensayo. Proceder según se indica para el volumen apropiado de la unidad en Preparaciones líquidas y analizar extrayendo no menos de tres alícuotas, cada una no menor de 5 ml, y colocarlas en el sensor del sistema de recuento por bloqueo de luz. Descartar los datos de la primera alícuota.

Cálculos -

Muestras combinadas (inyectables de pequeño volumen) - Promediar los recuentos de dos o más alícuotas analizadas. Calcular el número de partículas en cada envase por la fórmula siguiente:

P V1

Van

en la cual P es el recuento de partículas promedio obtenido a partir de las porciones analizadas, V1 es el volumen de mezcla combinada, en ml, Va es el volumen de cada porción analizada, en ml, y n es el número de unidades mezcladas.

Muestras individuales (inyectables de pequeño volumen) - Promediar los recuentos obtenidos para las porciones de las alícuotas de 5 ml o mayores de cada unidad analizada y calcular el número de partículas en cada unidad por la fórmula siguiente:

PV

V a

en la cual P es el recuento de partículas promedio obtenido a partir de las porciones ensayadas, V es el volumen, en ml, de la unidad ensayada y Va es el volumen, en ml, de cada porción analizada.

Muestras de unidades individuales (inyectables de gran volumen) - Promediar los recuentos obtenidos para dos o más alícuotas de 5 ml tomadas de la muestra. Calcular el número de partículas en cada mililitro del inyectable analizado por la fórmula siguiente:

P

V

en la cual P es el recuento de partículas promedio para una muestra individual de 5 ml o de mayor volumen y V es el volumen, en ml, de la porción tomada.

Interpretación -

El inyectable cumple con los requisitos del ensayo si el número promedio de partículas presentes en las unidades ensayadas no es mayor al valor indicado en la Tabla 1.

Ensayo de recuento microscópico de partículas

El ensayo de recuento microscópico de partículas puede aplicarse tanto a inyectables de gran volumen como de pequeño volumen. Este ensayo cuenta las partículas sólidas subvisibles presentes, después de la recolección de las mismas sobre una membrana filtrante. Al realizar este ensayo, no se deben considerar los materiales amorfos, semilíquidos o aquellos que presenten una mancha o decoloración sobre la superficie de la membrana. Estos materiales muestran poco o ningún relieve en su superficie y presentan un aspecto gelatinoso o similar al de una película.

Aparatos -

Microscopio - Emplear un microscopio binocular. La combinación de lentes del objetivo y el ocular debe dar una magnificación de 100 10x. El objetivo debe ser de 10x de magnificación nominal, acromático planar o de mejor calidad, con una abertura numérica mínima de 0,25. Los oculares deben poseer una magnificación de 10x. Además, el ocular debe ser diseñado para aceptar y enfocar en un ocular reticulado. El microscopio debe tener una platina mecánica capaz de sostener y recorrer en su totalidad el área de una membrana filtrante de 25 ó 47 mm de diámetro.

Iluminadores - Se requieren dos iluminadores. Uno es un iluminador auxiliar externo, de foco regulable para iluminar en dirección oblicua con un ángulo de 10 a 20. El otro es un iluminador episcópico interno de campo brillante. Ambos iluminadores deben ser de una potencia suficiente para proporcionar una fuente de iluminación brillante y pareja, pueden estar equipados con filtros de color azul para reducir la fatiga del operador durante su empleo.

Retículo para la medición del diámetro de partículas - Emplear un ocular reticulado circular (ver Figura) apropiado para el modelo de objetivo y ocular del microscopio en que los círculos de clasificación por tamaño estén dentro de 2 % del tamaño establecido en el plano de la platina del aparato.

Según se puede observar en la Figura, el círculo grande está fraccionado por filamentos en cuadrantes que determinan el campo reticular (CR). Los círculos transparentes, de color negro, con diámetros de 10 y 25 m en 100x se proporcionan como escalas de comparación para clasificar las partículas por tamaño.

Micrómetro - Emplear un micrómetro de platina certificado, con graduaciones de 10 m.

Aparatos de filtración - Emplear un embudo filtrante apropiado para el volumen a ensayar, con un diámetro mínimo de aproximadamente 21 mm. El embudo debe ser de plástico, vidrio acero inoxidable. Colocar el filtro sobre una criba de acero inoxidable o una placa de vidrio sinterizado para que actúe como difusor del filtrado. El aparato de filtración está equipado con una fuente de vacío, un dispensador de solvente capaz de entregar solvente filtrado a través de un filtro 1,2 m o porosidad menor en un intervalo de presiones de 10 a 80 psi y membranas filtrantes (de 25 ó 47 mm, reticuladas o no, de color negro o gris oscuro, de un material apropiado compatible con el producto, de 1,0 m o porosidad menor). Emplear pinzas de punta roma para manipular los filtros de membrana.

Ambiente para el ensayo -

Una campana de flujo laminar u otro recinto - con flujo de aire laminar, con una capacidad suficiente para separar el área donde se lleva a cabo el análisis, con aire filtrado a través de un filtro HEPA no habiendo más de 3.500 partículas (mayores o iguales a 0,5 m) por metro cúbico. Para la determinación del blanco, medir con el dispensador un volumen de 50 ml de agua destilada o desionizada y filtrada. Aplicar vacío y pasar el volumen total de agua a través del filtro de membrana. Retirar la membrana de la base del embudo y colocarla sobre una cinta con adhesivo en ambas caras, en un portaobjetos o una placa de Petri. Dejar secar la membrana, examinarla microscópicamente a una magnificación de 100x. Si no más de 20 partículas mayores o iguales a 10 m y 5 partículas mayores o iguales a 25 m están presentes dentro del área de filtración, el nivel de partículas es apropiado para llevar a cabo el ensayo.

Durante todo este procedimiento, se deben emplear guantes apropiados libres de polvo, materiales de vidrio y equipos completamente limpios. Antes de realizar el ensayo limpiar todas las superficies del área de flujo laminar con un solvente apropiado. El material de vidrio y los equipos deben haber sido enjuagados sucesivamente con una solución de detergente libre de residuos a aproximadamente a 100 C, agua caliente, agua destilada o desionizada y alcohol isopropílico. [NOTA: el agua destilada o desionizada y el alcohol isopropílico se deben filtrar empleando filtros de 1,2 pm o porosidad menor]. Hacer los enjuagues bajo un flujo laminar equipado con filtros HEPA. Dejar secar los materiales de vidrio y los aparatos de filtración bajo la campana. Preferentemente, la campana debe estar ubicada en una habitación separada, provista con aire filtrado y acondicionado, mantenida bajo presión positiva.

Preparación del microscopio - Colocar el iluminador auxiliar cerca de la platina, enfocar el iluminador para dar un área concentrada de iluminación sobre una membrana filtrante colocada en la platina. Ajustar la altura del iluminador para que el ángulo de incidencia de la luz sea 10 ó 20 con respecto a la horizontal. Empleando el iluminador episcópico interno, abrir totalmente el campo y la abertura de los diafragmas. Centrar el filamento de la lámpara y enfocar el microscopio en un filtro que contenga partículas. Ajustar la intensidad de iluminación reflejada hasta que las partículas sean claramente visibles y muestren sombras pronunciadas. Ajustar la intensidad de iluminación episcópica al grado más bajo y luego aumentar la hasta que las sombras producidas por las partículas muestren la disminución menos perceptible de contraste.

Operación del retículo para la medición del diámetro de partículas -

El error relativo del retículo empleado debe medirse inicialmente con un micrómetro de platina certificado. Para realizar esto, alinear la escala micrométrica del retículo con la del micrómetro de la platina para que queden paralelas. [NOTA: comparar las escalas, empleando el mayor número posible de graduaciones]. Leer el número de divisiones de la escala del ocular reticulado, DEOR, comparado con las divisiones del micrómetro de la platina, DMP. Calcular el error relativo por la fórmula siguiente:

Un error relativo de 2 % es aceptable. La técnica básica de medición aplicada con el empleo del retículo para la medición del tamaño de partículas consiste en transformar mentalmente la imagen de cada partícula en un círculo y luego compararlo con los círculos de referencia del retículo de 10 y 25 m. El proceso de medición por tamaño se lleva a cabo sin superponer la partícula en los círculos de referencia; las partículas no deben moverse de sus localizaciones dentro del campo del retículo (el círculo grande) para compararlas con los círculos de referencia. Emplear el diámetro interno de los círculos claros de referencia del retículo para clasificar por tamaño a las partículas blancas y transparentes. Emplear el diámetro exterior de los círculos de referencia de color negro del retículo para clasificar por tamaño a las partículas oscuras.

Rotar el retículo en el ocular derecho del microscopio para que la escala lineal quede ubicada en la parte inferior del campo; enfocando rápida y definidamente el retículo mediante el ajuste del anillo derecho de la dioptra del ocular mientras se observa la muestra fuera de foco: Enfocar el microscopio sobre la muestra, mirando solamente a través del ocular derecho. Luego, mirando a través del ocular izquierdo, ajustar la dioptra del ocular izquierdo para enfocar con definición.

Preparación del aparato de filtración - Lavar preferentemente todos los componentes del aparato de filtración en una solución de detergente líquido y agua caliente. Enjuagar con agua caliente. Aplicar un segundo enjuague con agua destilada o desionizada y filtrada, empleando agua a presión sobre todas las superficies exteriores e interiores del aparato de filtración. Repetir el procedimiento del enjuague a presión empleando alcohol isopropílico filtrado. Finalmente, empleando el dispositivo de enjuague a presión, enjuagar el aparato con agua destilada o desionizada y filtrada.

Retirar una membrana filtrante de su envase empleando una pinza limpia de punta roma. Emplear agua destilada o desionizada y filtrada para lavar ambos lados del filtro. Armar el aparato de filtración con el difusor en la base y colocar el filtro sobre el difusor. Colocar el embudo en la parte superior de la base y fijarlo en su lugar.

Preparación muestra - Proceder según se indica en Preparación muestra en Recuento de partículas por bloqueo de luz.

Preparaciones líquidas - Para inyectables de pequeño volumen con un volumen mayor o igual a 25 ml, ensayados individualmente, y para inyectables de gran volumen, se debe realizar el ensayo sobre todo el volumen de la unidad. Para inyectables de gran volumen o inyectables de pequeño volumen donde el volumen de cada unidad es mayor o igual a 25 ml se deben ensayar menos de diez unidades seleccionadas en base a la definición de un plan de muestreo estadístico. Mezclar y suspender las partículas en cada unidad invirtiendo veinte veces su contenido. Abrir las unidades de manera de generar el menor número posible de partículas. Para productos con un volumen menor a 25 ml, abrir y combinar el contenido de diez o más unidades en un envase limpio. Filtrar las unidades de gran volumen en forma individual. Se pueden filtrar individualmente las unidades de pequeño volumen mayor o igual a 25 ml.

Mediante el empleo del embudo de filtración transferir el volumen total de una solución combinada o una unidad individual y aplicar vacío. Si se va a emplear el procedimiento de recuento parcial (ver Procedimiento de recuento parcial en Recuento de Partículas), no dejar que el volumen del líquido en el embudo filtrante se encuentre por debajo de la mitad del volumen del embudo entre cada uno de los llenados. [NOTA: emplear un embudo filtrante apropiado al volumen de la solución si se va emplear el procedimiento de recuento parcial. Esto es necesario para asegurar la distribución pareja de las partículas sobre la membrana]. Después de agregar la última porción de la solución, comenzar a lavar las paredes del embudo filtrante aplicando en forma circular agua destilada o desionizada y filtrada y dejar de lavar antes que el volumen llegue por debajo de un cuarto del nivel de llenado. Mantener el vacío hasta haber filtrado todo el líquido. Retirar el embudo filtrante de la base mientras se mantiene el vacío, cerrar el vacío y retirar la membrana con una pinza de punta roma. Colocar la membrana sobre una placa de Petri u otro envase similar, fijarla con una cinta con adhesivo en ambas caras e identificar la muestra. Dejar que el filtro se seque al aire en el recinto de flujo laminar dejando la tapa del envase semiabierta.

Polvos y liofilizados - Proceder según se indica en Preparación muestra en Recuento de partículas por bloqueo de luz. Empleando una solución combinada de diez unidades o más o el número requerido de unidades individuales, proceder según se indica en Preparaciones líquidas.

Inyectables en envases multidosis - Proceder según se indica en Preparaciones líquidas, filtrando el volumen total de la unidad. Calcular el resultado del ensayo referido al volumen de una porción equivalente a la dosis máxima declarada en el rótulo. Considerar que esta porción es el equivalente al contenido del envase total. Por ejemplo, si el volumen total del envase es 50 ml y el volumen de la dosis máxima es 10 ml, el resultado del ensayo de recuento del volumen total se multiplicará por 0,1 para obtener el resultado del ensayo en base a la dosis máxima de 10 ml. [NOTA: para los cálculos, considerar que esta porción es el equivalente al contenido de un envase lleno].

Recuento de partículas

El ensayo microscópico descrito en esta sección es flexible con respecto al modo de recuento, ya que permite contar partículas por ml, en muestras que contengan 1 partícula por ml así como en muestras que contengan un número significativamente mayor de partículas por ml. Este método puede emplearse cuando se cuentan todas las partículas en la superficie de la membrana de análisis o cuando solamente se cuentan aquellas partículas en un área fraccionada de la superficie de la membrana.

Procedimiento de recuento total

En un recuento total, se ignora el campo reticular (CR) definido por el círculo grande del retículo y se emplea el filamento vertical. Barrer la membrana totalmente de derecha a izquierda en un camino que colinda, pero no se superponga, con el primer camino de barrido. Repetir este procedimiento, moviéndose de izquierda a derecha, y nuevamente a la izquierda, hasta que todas las partículas de la membrana hayan sido contadas. Registrar el número total de partículas mayores o iguales a 10 m y mayores o iguales a 25 m. Para inyectables de gran volumen, calcular el número de partículas, por ml, para la unidad ensayada, por la fórmula siguiente:

P

V

en la cual P es el número total de partículas contadas y V es el volumen de la solución, en ml. Para inyectables de pequeño volumen, calcular el número de partículas, por unidad, por la fórmula siguiente:

P

n

en la cual P es el número total de partículas contadas y n es el número de unidades combinadas.

Procedimiento de recuento parcial

Si se realizara un recuento parcial de partículas sobre una membrana, el operador debe, en primer lugar, asegurarse de que se realice una distribución homogénea de partículas en la membrana. Esto es evaluado barriendo rápidamente para buscar agregados de partículas. No debe observarse ningún agregado. Contar las partículas mayores o iguales a 10 m en el CR en el borde del área de filtración así como en el centro de la membrana. El número de partículas mayores o iguales a 10 m en el CR con el recuento total más alto de partículas no es más del doble del CR con el recuento más bajo de partículas. Rechazar un filtro que no cumpla estos criterios y preparar otro si se emplea un procedimiento de recuento parcial, o analizar esta membrana por el método de recuento total.

El número normal de CR contados para un recuento parcial es 20. Si se desea un intervalo de confianza más pequeño con respecto al resultado, puede contarse un número de campos y partículas mayor. Contar todas las partículas que tengan un diámetro mayor o igual a 10 m y mayor o igual a 25 m dentro del CR y aquéllas que están en contacto con el lado derecho del círculo del CR. No contar las partículas fuera del CR. Ignorar aquéllas que tocan el lado izquierdo del círculo de CR. La línea divisoria entre el lado derecho y el izquierdo del círculo del CR es el filamento vertical. [NOTA: determinar el tamaño de la partícula sin cambiar el aumento o la iluminación del microscopio].

Para realizar un recuento parcial de partículas sobre una membrana, comenzar en el borde derecho del centro del área de filtración y empezar a contar los CR adyacentes. Cuando se llega al borde izquierdo del área de filtración, mover a un CR hacia la parte superior del filtro y continuar contando los CR avanzando en la dirección opuesta. El movimiento de un CR al próximo puede ser realizado por dos métodos. Un método es definir un punto de referencia (partícula o irregularidad de la superficie del filtro) y mover un CR en relación al punto. Un segundo método es emplear el vernier de la platina del microscopio para mover 1 mm entre los CR. Para facilitar esto último, ajustar la posición de los controles x e y en la platina del microscopio a un número entero en la posición inicial en el centro del borde derecho del área dé filtración; luego cada CR será una división entera de movimiento del control x de posición de la platina. Si se llega a la parte superior del área de filtración antes de obtener el número deseado de CR se empieza nuevamente en el centro del borde derecho del área de filtración un CR por debajo del empleado la primera vez. Esta vez moverse hacia abajo en la membrana cuando se llega al final de una fila de los CR. Continuar como antes hasta completar el número de CR.

Para inyectables de gran volumen, si se emplea un procedimiento de recuento parcial para los intervalos de tamaño 10 y 25 m, calcular las partículas por ml, por la fórmula siguiente:

PAt / Ap V

en la cual P es el número de partículas contadas, At es el área de filtración de la membrana , en mm2, Ap es el área parcial contada, en mm2, en base al número de campos reticulares contados y V es el Volumen de. solución filtrada, en ml. Para una solución combinada (para unidades de inyectables de pequeño volumen que contengan menos de 25 ml) o para una sola unidad de un inyectable de pequeño volumen, calcular el número de partículas por unidad, por la fórmula siguiente:

PA t / Ap n

en la cual n es el número de unidades contadas y los otros términos son los definidos anteriormente.

Para todos los tipos de productos, si el material ensayado ha sido diluido para que disminuya la viscosidad, el factor de dilución debe tomarse en cuenta al calcular el resultado final del ensayo.

Interpretación

El inyectable cumple con los requisitos del ensayo si el número de partículas promedio presente en las unidades ensayadas no excede los valores enumerados en la Tabla 2.